1、课题2,多聚酶链式反应扩增DNA片断,一、多聚酶链式反应,多聚酶链式反应：简称PCR，是一种 体外迅速扩增DNA片段的技术。,二、DNA在细胞内的复制,（1）模板：,DNA母链,1、DNA复制条件：,（2）原材料：,脱氧核苷酸,（3）酶,解旋酶,DNA聚合酶,（4）引物：,小段的单链DNA或RNA,2、双链DNA的结构,DNA空间结构,反向平行,5,5,3,3,3、DNA的复制,特点：边解旋边复制,3,5,3,5,三、PCR（多聚酶链式反应）,（1）模板：,需扩增的DNA分子,1、PCR原理,（2）原材料：,脱氧核苷酸,（3）引物：,小段的单链DNA或RNA,与DNA体内复制相同点,三、PCR
2、（多聚酶链式反应）,（4）解旋方式,PCR是利用DNA的热变性原理来解旋的,1、PCR原理,与DNA体内复制不同点：,高温解旋,80-100,50左右,三、PCR（多聚酶链式反应）,（5）耐高温的DNA聚合酶,(Taq酶),1、PCR原理,（6）适宜的PH,反应液中加入缓冲液,与DNA体内复制不同点：,（7）复制特点：,解完旋后，才复制,2、PCR的反应过程,PCR一般经历多次复制，每次复制都经历三个基本步骤变性、复性和延伸,变性,加热至900C以上。双链DNA解旋为单链，,复性（退火）,温度降到500C左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合,2、PCR的反应过程,PCR一般经历多次复制，每次复制都经历三个基本步骤变性、复性和延伸,延伸,温度升至72左右，在Taq酶的作用按碱基互补配对的原则，将脱氧核苷酸沿子链的5 3端连接延伸,
