免疫学检测原理及临床应用.ppt

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1、免疫学检测原理及临床应用免疫学检测原理及临床应用相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎:http:/fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库,其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成,以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的,可以访问探生网http:/进行咨询,期待您的加入本文由探生科技技术人员提供,Fantibo

2、dy全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!内容提要:概念基于抗原抗原-抗体反应抗体反应的检测方法免疫细胞细胞检测免疫分子分子检测免疫学诊断诊断与检测掌握:掌握:原理原理 临床应用临床应用本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!概念:概念:免疫学免疫学细胞生物学细胞生物学分子生物学分子生物学 应用:免疫相关疾病的诊断、病情应用:免疫相关疾病的诊断、病情检测和疗效评价等。检测和疗效评价等。抗原抗原抗体抗体免疫细胞免疫细胞细胞因子细胞因子检测检测理论和方法理论和方法定性定性 定量定量本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专

3、家!第第1 1节节 基于抗原基于抗原- -抗体反应抗体反应 (antigen antibody reaction)的检测方法的检测方法 一、原理一、原理二、反应的特点二、反应的特点三、影响因素三、影响因素四、基本检测方法四、基本检测方法本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家! 一、原理一、原理1、抗原抗体反应的、抗原抗体反应的 特异性特异性2、抗原抗体反应的、抗原抗体反应的 可见性可见性 抗抗原原抗抗体体按按适适当当比比例例结结合合,形形成成肉眼可见的现象。肉眼可见的现象。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家

4、!应应 用用1、利用已知抗原检测未知抗体、利用已知抗原检测未知抗体(1)检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病: 伤寒病、流行性乙型脑炎、AIDS病等。(2)检测自身抗体诊断自身免疫病:SLE、类风湿性关节炎等2、利用已知抗体检测未知抗原、利用已知抗体检测未知抗原(1)鉴定病原菌:诊断疾病)鉴定病原菌:诊断疾病(2)检测肿瘤相关抗原:检测甲胎蛋白以诊断肝癌)检测肿瘤相关抗原:检测甲胎蛋白以诊断肝癌(3)检测血型抗原、)检测血型抗原、HLA抗原:鉴定血型,亲子鉴定抗原:鉴定血型,亲子鉴定(4)检测药物半抗原:)检测药物半抗原: 确认运动员是否服用兴奋剂确认运动员是否服用兴奋剂本文由探生科技技术人

5、员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!(一)抗原(一)抗原-抗体结合反应的特点抗体结合反应的特点特异性带现象与可见性可逆性取决于抗原表位与抗体高变区结取决于抗原表位与抗体高变区结合部位空间构型的合部位空间构型的互补互补的程度的程度亲和力(亲和力(affimity)亲合力(亲合力(avidity)本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!抗原抗体结合的带现象带现象与可见性(一)抗原(一)抗原-抗体结合反应的特点抗体结合反应的特点本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!可逆性:可逆性:(一)抗

6、原(一)抗原-抗体结合反应的特点抗体结合反应的特点低低pH值值高浓度盐高浓度盐冻融等冻融等AgAb解离解离取决于亲取决于亲和力大小和力大小本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!(二)抗原抗体反应的影响因素(二)抗原抗体反应的影响因素电解质电解质酸碱度酸碱度温度温度抗原抗体的性质抗原抗体的性质本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!1.电解质:电解质: 亲水性亲水性-疏水性疏水性 失去电荷失去电荷-发生凝集发生凝集(二)抗原抗体反

7、应的影响因素(二)抗原抗体反应的影响因素本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!2、酸碱度:、酸碱度: 最适最适pH值:值:68 假阳性假阳性 假阴性假阴性(二)抗原抗体反应的影响因素(二)抗原抗体反应的影响因素本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!3.温度:温度: 适当温度适当温度-增加碰撞机会增加碰撞机会 加快结合速度加快结合速度 37(二)抗原抗体反应的影响因素(二)抗原抗体反应的影响因素本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!4、抗原和抗体的性质、抗原和抗体的

8、性质 关键因素关键因素-特异性和亲和力特异性和亲和力 决定因素决定因素-二者的比例二者的比例(二)抗原抗体反应的影响因素(二)抗原抗体反应的影响因素本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!(三)(三) 抗原或抗体的检测方法抗原或抗体的检测方法 凝集反应凝集反应沉淀反应沉淀反应补体参与的反应补体参与的反应免疫标记技术免疫标记技术本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家! (一)凝集反应(一)凝集反应(agglutinationagglutination) 颗颗粒粒性性抗抗原原(红红细细胞胞、细细菌菌、 乳乳胶胶颗颗

9、粒粒等等)与与抗抗体体特特异异性性结结合合,形形成肉眼可见的凝集块。成肉眼可见的凝集块。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!1、直接凝集、直接凝集(direct agglutination)2、间接凝集、间接凝集 (indirect agglutination) 3、间接凝集抑制试验、间接凝集抑制试验(in direct agglutination inhibition test)4、协同凝集试验、协同凝集试验 (co-agglutination test) (一)凝集反应(一)凝集反应(agglutination)本文由探生科技技术人员提供,Fa

10、ntibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!(二)沉淀反应(二)沉淀反应(precipitationprecipitation) 可溶性抗原可溶性抗原(免疫球蛋白、(免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等)与相细胞裂解物、组织浸液等)与相应抗体结合,应抗体结合, 形成不溶性免疫复形成不溶性免疫复合物,出现不透明的沉淀物。多合物,出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行,形成在半固体琼脂凝胶上进行,形成白色的沉淀。白色的沉淀。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!1、单向免疫扩散、单向免疫扩散(single single immunodiffus

11、ionimmunodiffusion)常用于测定常用于测定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。等。沉淀环沉淀环沉淀环沉淀环抗体混于琼脂凝抗体混于琼脂凝抗体混于琼脂凝抗体混于琼脂凝胶中制板胶中制板胶中制板胶中制板环的环的环的环的直径与抗原直径与抗原直径与抗原直径与抗原含量成正相关含量成正相关含量成正相关含量成正相关本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!2 2、双向免疫扩散(、双向免疫扩散(、双向免疫扩散(、双向免疫扩散(douledoule immunodiffusionimmunodiffusion):):):):常用于抗常用于抗常用于抗常用于抗原

12、或抗体的定性检测、组成和两种抗原相关性分析。原或抗体的定性检测、组成和两种抗原相关性分析。原或抗体的定性检测、组成和两种抗原相关性分析。原或抗体的定性检测、组成和两种抗原相关性分析。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!3 3、免疫电泳(、免疫电泳(、免疫电泳(、免疫电泳(immunoelectrophoresisimmunoelectrophoresis)对流免疫电泳对流免疫电泳(counterimmunoelectrophoresis)本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!4 4、免疫比浊法(、免疫比浊

13、法(、免疫比浊法(、免疫比浊法(immunonephelomtryimmunonephelomtry):):):):快速简便。用快速简便。用快速简便。用快速简便。用于血清于血清于血清于血清IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM、 补体补体补体补体C3C3、C4C4含量测定含量测定含量测定含量测定本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家! (三)补体参与的抗原抗体反应(三)补体参与的抗原抗体反应1 1、50 %50 %补体溶血试验(补体溶血试验(补体溶血试验(补体溶血试验(CH50CH50测定)测定)测定)测定) 血清总补体量测定血清总补体量测定血清总补

14、体量测定血清总补体量测定2、补体结合试验、补体结合试验(complement fixation test):检测抗原或抗体。检测抗原或抗体。原理:用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体进行诊断原理:用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体进行诊断试验原理试验原理试验原理试验原理?检测系统:待测样品检测系统:待测样品检测系统:待测样品检测系统:待测样品和已知抗原(或抗体)和已知抗原(或抗体)和已知抗原(或抗体)和已知抗原(或抗体)指示系统:指示系统:指示系统:指示系统:SRBCSRBC和溶血素和溶血素和溶血素和溶血素溶血溶血溶血溶血阴性;不溶血阴性;不溶血阴性;不溶血阴性;不溶血阳性阳性阳性阳

15、性补体补体补体补体本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家! 用用用用标记物标记抗体或抗原标记物标记抗体或抗原标记物标记抗体或抗原标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免进行抗原抗体反应借以提高免进行抗原抗体反应借以提高免进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊断的敏感性疫学诊断的敏感性疫学诊断的敏感性疫学诊断的敏感性荧光素荧光素荧光素荧光素 :异硫氰酸荧光素(黄绿异硫氰酸荧光素(黄绿异硫氰酸荧光素(黄绿异硫氰酸荧光素(黄绿色荧光)、藻红蛋白、色荧光)、藻红蛋白、色荧光)、藻红蛋白、色荧光)、藻红蛋白、 罗丹明罗丹明罗丹明罗丹明(红色荧光)(红色荧光)(红

16、色荧光)(红色荧光)放射性同位素:放射性同位素:放射性同位素:放射性同位素: 125125I I、131131I I酶:酶:酶:酶:辣根过氧化物辣根过氧化物辣根过氧化物辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶酶、硷性磷酸酶酶、硷性磷酸酶酶、硷性磷酸酶免疫荧光检测法(免疫荧光检测法(免疫荧光检测法(免疫荧光检测法(IFAIFA)放射免疫检测法(放射免疫检测法(放射免疫检测法(放射免疫检测法(RIARIA)酶免疫检测法(酶免疫检测法(酶免疫检测法(酶免疫检测法(EIAEIA) (四)免疫标记技术(四)免疫标记技术液相(液相(液相(液相(ELISAELISA)、)、)、)、固相(免疫组化技术)固相(免疫组化技术)固相(免疫组化技术)固相(免疫组化技术)本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!1、免疫荧光法、免疫荧光法(immunofluorescence,IF)用荧光标记抗体,再与待检标本用荧光标记抗体,再与待检标本中抗原反应那个,所形成的抗原中抗原反应那个,所形成的抗原抗体复合物在荧光显微镜下散发抗体复合物在荧光显微镜下散发荧光,借此对抗原进行定性和定荧光,借此

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